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在配置顆粒培養基過程中偶爾會出現不凝固一搖晃就破碎現象原因

點選次數·▩·:116 釋出時間·▩·:2022-05-12
  在微生物培養時經常會用到顆粒培養基•▩◕☁◕,但是•▩◕☁◕,在配製培養基過程中偶爾會出現不凝固•◕、半凝固或者一搖晃培養基就破碎的現象•▩◕☁◕,這是什麼原因?
 
  大量文獻指出•▩◕☁◕,瓊脂的凝固程度主要受到PH值和瓊脂含量的影響•▩◕☁◕,PH值較低(≤4.0)時•▩◕☁◕,PH值是影響凝固等級的主要因素;PH值較高(5.0~8.0)時•▩◕☁◕,瓊脂濃度是影響凝固等級的主要因素▩╃•↟。
 
  藥典上培養基配方中明確規定了PH值和瓊脂含量•▩◕☁◕,如配製操作正常•▩◕☁◕,凝固應是不會出現問題的▩╃•↟。為此•▩◕☁◕,我們針對培養基出現的凝固異常進行了分析及試驗·▩·:
 
  一•◕、培養基PH值問題·▩·:培養基滅菌前後PH值有何變化?經查閱大量相關學術研究•▩◕☁◕,不同培養基滅菌前後PH普遍有這樣的變化超勢·▩·:高壓滅菌前pH值4.5-8.0的培養基滅菌後pH值變化較小•▩◕☁◕,偏酸性的略上升•▩◕☁◕,偏鹼性的略下降▩╃•↟。但酸性或鹼性較強的培養基滅菌前後PH值變化較大▩╃•↟。因我們常使用的培養基pH值均在4.5-8.0範圍內•▩◕☁◕,所以偶爾出現的培養基凝固不好應不是PH值影響的▩╃•↟。
 
  二•◕、瓊脂問題·▩·:瓊脂是培養基zui常用的凝固劑•▩◕☁◕,是一種海藻多糖•▩◕☁◕,PH在4-10之間才會形成凝膠•▩◕☁◕,且其凝膠強度和瓊脂糖的濃度有關▩╃•↟。目前我們實驗室使用的均是成熟配方的培養基•▩◕☁◕,為什麼會偶爾出現凝固不好的現象呢?
 
  在仔細核查了瓊脂粉的生產廠家•◕、批號•◕、保質期及配製時的稱量•◕、溶解•◕、定容和轉移等過程▩╃•↟。排除了瓊脂粉質量問題•▩◕☁◕,但發現培養基分裝準備高溫滅菌時•▩◕☁◕,有部分經開水溶解的瓊脂呈細小顆粒狀沉在瓶底•▩◕☁◕,即未完全溶解•▩◕☁◕,後查閱資料發現•▩◕☁◕,瓊脂加熱至95℃時才開始溶解•▩◕☁◕,說明我們用熱水溶解瓊脂時•▩◕☁◕,瓊脂未能完全溶解•▩◕☁◕,這可能是導致培養基難凝固的原因▩╃•↟。
 
  於是我們在配製顆粒培養基時•▩◕☁◕,先將瓊脂煮沸5分鐘後再分裝•◕、滅菌•▩◕☁◕,後培養基冷卻至40℃時能完全凝固▩╃•↟。自瓊脂溶解方式改變後•▩◕☁◕,便未再出現培養基不凝固•◕、半凝固或者一搖晃培養基就破碎的現象▩╃•↟。

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